FUS-50L（A）發酵罐消毒（非SIP）

實消

進料

消前體積=計料體積-消毒蒸汽冷凝水-消后合料體積-接種/移種體積，此時進料量以消前體積計。所用發酵罐罐體和補料均有稱重設備，建議所有濃度均已質量分數計算。
配料時應充分考慮每種物料的性質，濃酸、片堿禁止直接混合，大多數金屬離子、銨離子在酸性環境消毒，消后調pH，有豐富氮源的培養基葡萄糖分消，用量很少的物質配成母液按比例添加，不能耐受高溫消毒的組分采用過濾除菌，接種前在火焰保護下加入或者補料形式加入。
? 進罐前確認罐內清洗干凈、罐底閥關閉、電極已校準安裝。
? 投料后加水至消前體積/質量。

夾套預熱

? 打開攪拌，低轉速，建議小于200rpm，如有大量豆粉、淀粉等不溶物質，適當開空氣。
注意：如需使用空氣，須打開旁路閥門，將質量流量計前后閥門關閉，避免使用質量流量計控制流量，以防止出現意外時損毀質量流量計。
? 確認夾套進水閥門關閉、夾套出水閥門關閉，尾氣分析取樣閥關閉；排氣閥全開。
? 打開夾套排凝閥門，緩慢打開蒸汽進夾套閥門，注意觀察夾套壓力表，壓力不得高于0.2MPa，待夾套水排盡后，開大夾套進蒸汽閥，快速預熱升溫；等待溫度到達95℃以上后，執行下一步（對于沒有配備夾套排污疏水閥的產品，可以適當關小夾套排污閥）。
? 確認質量流量計前后閥門關閉，質量流量計旁路閥門打開；保持轉子流量計閥門和空氣進過濾器閥門開，關閉空氣進罐隔膜閥，關閉蒸汽進夾套閥門，保持夾套排冷凝水閥門全開，關閉攪拌。
? 如果需要過濾器系統同步滅菌，保持質量流量計旁路閥門、轉子流量計閥門開啟，關閉空氣進過濾器閥門和空氣進罐隔膜閥，然后按照3.3 操作。
注意：如果需要減少罐內冷凝水量，蒸汽進夾套閥門可以保持一定較小的開度。

罐內進蒸汽

? 打開罐底進蒸汽閥門，緩慢打開取樣閥，待沒有冷凝水大量流出后，維持取樣口有少許蒸汽冒出，打開罐底閥進蒸汽，打開蒸汽進空氣分布器閥門。溫度到達100℃后，關小排氣閥門，升溫升壓。

保壓

? 溫度到達120攝氏度后，關小罐底進蒸汽閥門，用蒸汽進空氣分布器閥門和排氣閥控制溫度維持在121±1℃。
? 保壓30min或者按工藝時間。
? 保壓過程中，保持接種口松動（由擰緊狀態擰松半圈到一圈，建議在升溫以前擰松，強烈不建議在帶壓狀態操作），使接種口排氣口有蒸汽冒出。

滅菌結束后自然降溫降壓

? 保壓結束后，關閉罐底閥，關閉蒸汽進空氣分布器閥門，根據具體物性選擇全關或者保持開度排氣閥門。
注意：排氣降溫降壓會使得發酵液一直處于劇烈沸騰狀態，對于易氣泡的發酵液禁止采用這種方式降溫。

通氣后一次水冷卻

? 罐溫降低到110攝氏度后，打開空氣進罐隔膜閥進空氣，并僅能用此法門調整進氣流量，根據物性調整排氣閥門開度。
注意：易氣泡發酵液應維持較高的罐壓，使得溫度始終低于沸點；易氣泡發酵液通氣量不宜過大。
? 依次確認循環水進水閥門關，循環水排水閥門關，一次水排水閥門開，一次水進水閥門開；依次打開夾套排水閥，關閉夾套拍冷凝水閥，打開夾套進水閥，控制面板開手動冷卻。打開攪拌通常不高于200rpm。
注意：通水冷卻前一定要先通空氣維持罐壓；冷卻過程中隨時用排氣閥控制罐壓不低于0.05Mpa。

待用

? 溫度降低到60℃后溫度設為自動；如需使用循環水，按以下步驟依次操作：
? 關閉控溫度控制。
? 關閉一次水進水閥門。
? 關閉一次水排水閥門。
? 打開循環水回水閥門。
? 打開循環水進水閥門。
? 控制面板打開溫度自控。

改為質量流量計控制

? 確認轉子流量有讀數。
? 控制面板設定質量流量計流量為1vvm以上，并開啟自動。
? 依次全開質量流量計前后閥門。
? 觀察面板上質量流量計，當質量流量計讀數達到設定值后，緩慢關小質量流量計旁路閥門，直至關閉。
注意：若質量流量計流量讀數沒有達到設定值，可以嘗試慢慢關小質量流量計旁路閥門，并觀察質量流量計讀數是否增加，如果增加，可以繼續操作。
注意：質量流量計旁路關閉過程中，過濾器壓力和罐壓會下降，需要及時調整。
? 調整空氣進過濾器隔膜閥和排氣閥，使得過濾器壓力在0.1MPa，罐壓0.05MPa。
注意：過濾器壓力過高會使得質量流量計前后壓差不足導致無法穩定控制，出現流量鋸齒狀。出現此現象要降低過濾器壓力。
注意：過濾器壓力高于罐壓0.05MPa可以在一定程度上避免在空氣系統失壓導致料液進入空氣管路。

標定DO滿度

? 達到培養溫度、壓力后，DO標定滿度。

空消

? 取下pH、DO等電極，僅僅保留溫度電極，用悶頭將電極接口堵住。
? 向罐內加水沒過溫度電極，也可以空罐消毒。
? 以下同實消夾套預熱至一次水降溫過程。

過濾器消毒

? 確認空氣進過濾器閥門關閉、空氣進罐隔膜閥關閉。
? 打開過濾器外殼旁路、隔膜閥旁路閥門。
? 打開蒸汽閥門，調整隔膜閥旁路閥門開度，使得出口有少量蒸汽和水流出，過濾器排凝閥保持開度一圈左右，調整蒸汽進過濾器閥門開度維持過濾器壓力0.10-0.20Mpa 30min。
注意：隔膜閥旁路閥開度過大會使得維持壓力所需蒸汽流量升高，可能會使得過濾器穿孔。
? 依次關閉隔膜閥旁路、過濾器外殼旁路、蒸汽進過濾器閥門。
? 立即微開隔膜閥旁路，待過濾器外殼壓力低于空壓后，打開空氣進過濾器閥門使空氣進入過濾器
注意：停止蒸汽后，要立即排出部分蒸汽并通入空氣，在過濾器溫度降低之前吹干過濾器。
注意：由于過濾器在濕的狀態阻力比較大，干了以后阻力迅速減小，因此，開空氣進過濾器閥門時要緩慢，隨著濾芯干燥，過濾器壓力會隨之下降，需要增加空氣進過濾器閥門開度。
? 緩慢開大隔膜閥旁路閥門，維持過濾器外殼壓力0.1Mpa左右，待用。
注意：此處流量不宜過大，不能超出過濾器工作流量。